ATAC-seq
定義:
ATAC-seq(Assay for Transposase-Accessible Chromatin with high throughput sequencing)是使用高通量測(cè)序?qū)?/span>Tn5轉(zhuǎn)座酶易接近性染色質(zhì)區(qū)域進(jìn)行測(cè)序分析的一種表觀遺傳學(xué)研究技術(shù)。
該技術(shù)有兩大特點(diǎn):(1)轉(zhuǎn)座酶只對(duì)開放染色質(zhì)區(qū)域進(jìn)行切割;(2)轉(zhuǎn)座酶可以同時(shí)對(duì)切割下來的DNA片段的兩端添加測(cè)序接頭。
實(shí)驗(yàn)原理和方法:
(1)收集細(xì)胞或組織,制備細(xì)胞懸液;
(2)加入細(xì)胞膜裂解液,獲得細(xì)胞核;
(3)加入Tn5轉(zhuǎn)座酶,對(duì)處于開放狀態(tài)的DNA進(jìn)行酶切;
(4)回收酶切下來的DNA片段,PCR擴(kuò)增后進(jìn)行二代高通量測(cè)序。
測(cè)序參數(shù):illumina/BGI平臺(tái),6G
應(yīng)用方向:
1. 染色質(zhì)開放性圖譜繪制,注釋全基因組調(diào)控元件;
2. 預(yù)測(cè)參與調(diào)控生物學(xué)過程的轉(zhuǎn)錄因子;
結(jié)果示例:
(1)全基因組開放性區(qū)域圖譜分析
不同樣本間基因活性調(diào)控序列圖譜
(2)motif分析預(yù)測(cè)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合蛋白
(3)ATAC-seq與RNA-seq聯(lián)合分析
基因結(jié)構(gòu)開放狀態(tài)與基因表達(dá)水平關(guān)聯(lián)分析
樣本準(zhǔn)備: